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探针法qPCR实验是实时荧光定量PCR的一种,基于其高特异性、高灵敏的实时、定量检测优势,现已在病原体检测、基因表达分析、基因型鉴定、拷贝数变异分析、食安检测、环境检测、法医检测等诸多生物学和医学研究领域得到广泛应用。
基于探针法qPCR技术的检测与诊断试剂产品的开发,综合了上游分子酶原料、样本前处理、检测试剂反应体系优化、实时荧光定量PCR仪研发、注册申报(根据产品项目而有所不同)等多个环节。
在诸多环节中,上游分子酶原料是整个产品开发的起始点,也是关键点。众多从业企业或自己从头开发分子酶,或单独购买酶原料,或直接购买由原料生产厂家优化的qPCR Mix,或将整个试剂工艺整体外包……
市场之大,各自有对应策略,不管何种方法,目标都是提供可以真正解决问题的、具有高性价比的稳定产品线。
qPCR Mix通常包含除模板DNA、引物和探针外的其他反应所需成分,这其中起重要作用的是分子酶原料及buffer体系,如何选择或优化出合适的qPCR Mix是探针法qPCR实验成功的关键。启衡星生物的研发团队基于多年的工作经验,从qPCR Mix筛选与优化时需考虑的因素及筛选步骤等不同层面进行了总结。
探针法qPCR Mix筛选与优化需考虑的因素
1.实验目的:确定实验所需检测的目标基因类型,如基因表达分析、病原体检测基因突变分析等。选择与目标序列兼容的qPCR Mix。
2.扩增效率要求:尽量选择高效的qPCR Mix,以提高实验的灵敏度和特异性。
3.实验通量:根据单重或多重检测需求,选择需要的qPCR Mix。
4.稳定性和便捷性:选择预混液可以简化实验操作,减少误差,同时预混液的稳定性和保存条件也是需要考虑的因素;:选择热稳定性高的qPCR Mix。
5.成本效益:考虑实验预算,选择性价比高的qPCR Mix。
6.防污染:在qPCR Mix中添加防污染的成分(如UNG等),减少假阳性结果。
7.品牌和供应商:选择信誉好、服务质量高的品牌和供应商;考虑供应商的技术支持和产品售后服务。
8.用户评价:参考其他研究人员的使用体验和评价。
探针法qPCR Mix筛选步骤
1.确定实验目的与需求
2.查阅文献或咨询专业人士获取推荐
3.比较不同品牌qPCR Mix的性能参数
4.考虑实验成本和预算
5.进行预实验测试不同qPCRMix的性能
6.确定最适合实验需求的探针法qPCR Mix
启衡星探针法qPCR Mix产品列表
启衡星探针法qPCR Mix选择指南